Thiết kế vector tái tổ hợp để biểu hiện và cố định liên tục beta-mannanase trên bề mặt Lactobacillus plantarum WCFS1 sử dụng promoter thường trực Pgm

Tóm tắt

Lactobacillus plantarum là một loại vi khuẩn sinh axit lactic quan trọng trong thực phẩm. Nhiều nghiên cứu đã báo cáo về hiệu quả sử dụng vi khuẩn này để tổng hợp enzyme tự do. Tuy nhiên, rất ít nghiên cứu về việc phát triển L. plantarum như chất mang an toàn để sản xuất enzyme cố định. Ở nghiên cứu này, vector tái tổ hợp pPgm_1261ManB đã được thiết kế để biểu hiện và cố định beta-mannanase (ManB) lên bề mặt L. plantarum WCFS1 một cách liên tục nhờ protomor thường trực Pgm từ L. acidophilus NCFM. Với mục tiêu đó, hai đoạn pgm và lp1261-manB-myc được khuếch đại nhờ phản ứng PCR sử dụng khuôn lần lượt là vector pUC và pSIP_1261ManB với các cặp mồi tương ứng. Hai sản phẩm PCR được lai với nhau nhờ phương pháp PCR mở rộng vùng chồng lấp. Đoạn lai sau đó được gắn vào vector pSIP409GusA và tạo ra plasmid tái tổ hợp pPgm_1261ManB. Vector này tiếp tục được biến nạp vào tế bào biểu hiện L. plantarum nhằm nghiên cứu sự biểu hiện và cố định liên tục ManB trên bề mặt lợi khuẩn L. plantarum.